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| 01/09/2009 | 20:00 | RC Celta | - | Real Unión | 2:1 | |
| 02/09/2009 | 18:30 | CD Lagun Onak | - | Cerro Reyes | 2:1 | |
| 19:30 | UE Sant Andreu | - | UD Melilla | 3:1 | ||
| 19:30 | CD Leonesa | - | Unión Estepona | 4:0 | ||
| 19:45 | CE Sabadell | - | UD Marbella | 1:3 pso | ||
| 19:45 | UD Salamanca | - | CD Castellón | 4:3 pso | ||
| 20:00 | Ontinyent CF | - | UB Conquense | 2:1 | ||
| 20:00 | AD Alcorcón | - | CF Palencia | 2:0 | ||
| 20:00 | CF Atlético Ciudad | - | Real Oviedo | 3:2 | ||
| 20:00 | CD Alcoyano | - | Villajoyosa CF | 2:0 | ||
| 20:00 | Polideportivo Ejido | - | SD Ponferradina | 8:7 pso | ||
| 20:00 | Unión Deportiva Puertollano | - | Zamora CF | 3:0 | ||
| 20:00 | Girona FC | - | Gimnàstic de Tarragona | 1:0 | ||
| 20:00 | Levante UD | - | SD Huesca | 3:4 pso | ||
| 20:00 | Real Sociedad | - | Rayo Vallecano | 0:2 | ||
| 20:00 | Real Betis | - | Córdoba CF | 1:2 | ||
| 20:30 | Albacete | - | Hércules CF | 0:1 | ||
| 20:30 | FC Cartagena | - | Elche CF | 3:2 aet | ||
| 21:00 | UD Las Palmas | - | Cádiz CF | 2:1 | ||
| 03/09/2009 | 20:00 | CD Numancia | - | Real Murcia | 2:3 | |
| 09/09/2009 | 20:30 | AD Ceuta | - | Alicante CF | 4:5 pso | |
| 16/09/2009 | 20:00 | Mérida UD | - | CF Reus Deportiu | 5:4 pso |
